ELISA试剂盒实验中的质量控制要点与故障排除

　　一、核心质控要点

　　标准曲线的性

　　有效性：相关系数（R²）须>0.99，确保定量准确。

　　精确性：每点复孔的CV值应<10%，尤其是低浓度点。

　　范围匹配：确保待测样本的OD值落在标准曲线的最佳线性区间内。

　　板内与板间精密度

　　板内质控：设置高中低三个浓度的质控样本，验证同板操作的重复性。

　　板间质控：不同批次实验中使用相同的质控样本，监控实验稳定性。

　　样本与试剂

　　样本处理：严格遵循样本类型（血清、血浆、细胞上清）的处理与保存规范，避免反复冻融。

　　试剂平衡：所有试剂（特别是酶结合物和底物）使用前需恢复至室温并混匀，避免“边缘效应”。

　　二、常见故障与排除策略

　　问题：高背景（全板整体发色深）

　　排查：①洗涤不充分或污染→增加洗涤次数与浸泡时间；②封闭不充分或封闭液失效→优化封闭条件或更换封闭液；③酶结合物浓度过高或孵育过长→严格按说明书操作或进行预实验滴定。

　　问题：信号弱或无信号

　　排查：①试剂失效（尤其是酶和底物）或加样错误→检查试剂有效期，使用新批次验证；②孵育时间/温度不足→确保在设定条件下足时孵育；③样本中目标物含量极低或存在基质干扰→重新评估样本类型或进行预稀释。

　　问题：重复性差（复孔CV值过高）

　　排查：①加样操作不规范→确保使用校准过的移液器，并沿孔壁缓慢匀速加样；②洗板后残留液体不均→确保洗板后充分拍干（无液滴残留），但勿使孔壁干燥；③孵育时温度不均→使用水平摇床并确保酶标板覆盖加热模块。

　　结论：建立并记录每次实验的标准化操作流程（SOP），严格监控质控参数。出现问题时，遵循“从试剂到操作，从仪器到环境”的系统性排查逻辑，并优先通过重做标准曲线和质控样来验证系统本身是否正常。